Tsukune Aono (idade: 15-17 anos), um garoto comum, não pôde entrar para o ensino médio devido às más notas na escola. Porém, seu pai, durante uma caminhada, vê um homem deixar cair ao chão um documento. Ao pegá-lo, viu que se tratava de uma carta-convite ao portador para ingressar numa escola de ensino médio, a Youkai Gakuen. Sem dar ou pedir satisfações ao homem, leva o folheto para casa e o apresenta à esposa e ao filho como sendo a solução para o problema de Tsukune. Entretanto, a Youkai Gakuen é um internato para youkais, onde, além dos conteúdos curriculares tradicionais, os alunos são preparados para coexistir com os humanos e assim conseguirem sobreviver num mundo hoje dominado por estes. Humanos não podem entrar nesta escola, e o regulamento prevê que qualquer um que ali pise seja imediatamente morto. Certo de que entrou ali por engano e temendo por sua vida, Tsukune tenta fugir da escola, mas decide ficar por se apaixonar por Moka Akashiya, uma bela vampira que também estuda ali. Raça: Humano/Vampiro. 

Conhecido como o perturbador da família, Ayato é um buscador de atenção e ama travessura.  Ele olha para baixo sobre os outros e gosta de intimidar e provocar as pessoas.  Ele se refere a si mesmo a maior parte do tempo como "Ore-sama". Ayato é bastante rebelde e tem uma paixão por dispositivos de tortura; Tais como a donzela de ferro e um dispositivo como aquele podem ser encontrados em seu quarto, que usa uma cama (os pontos são removidos).  Ele também é o tipo que sempre se vangloria sobre si mesmo; Às vezes comandando todos a chamá-lo de Ayato-sama.  É também observou que ele come muito (embora apenas se é a sua comida favorita).  Ayato afirmou que os vampiros precisam beber sangue para saborear o sabor.  Sua comida favorita é takoyaki e fica muito irritado se alguém come sua comida.

Vampiro que salvou Yuuki há 10 anos de um Nível E. Kaname é o líder da Turma Noturna, e enquanto ele é sempre frio e autoritário com os seus companheiros Vampiros, é sempre gentil e doce com Yuuki. Por ser um raríssimo Sangue-Puro, é um Vampiro muito respeitado e temido. Entrou no Colégio para retribuir um favor que devia ao diretor, pois se ele entrasse outros vampiros entrariam também e ele faria com que seguissem as regras, e porque o Colégio seria um lugar perfeito para os seus planos. Geralmente Kaname é frio e calculista, sendo que dificilmente mostra o que realmente sente ou pensa [ele só muda esse temperamento quando está perto da Yuuki]. Kaname odeia e sente muitos ciúmes de Zero, principalmente por causa de Yuuki. Por ser um puro-sangue tem diversas habilidades. De acordo com o mangá, tem 18 anos em idade de Vampiro.

Perturbado e excêntrico mesmo como uma criança, geralmente fica sozinho, conversando com seus bonecos, comete auto-mutilação ou transforma os outros em bonecos de cera. Kanato geralmente age de forma mimada, infantil e exigindo geralmente chantageando, emocionalmente ou com lágrimas ou birras histéricas para obter o seu desejo, ele tem o humor instável, e mostra sinais de comportamento psicótico quando irritado. Possui uma ligação muito forte com seu urso de pelúcia precioso, Teddy, a quem ele fica sempre segurando, tornar-se enfurecido se uma pessoa toma-o ou quando alguém fala "familiarmente" com ele (Teddy).

É guardião do turno da noite num colégio de Vampiros mas odeia Vampiros, principalmente os Sangue-Puros. A maioria do alunos, teme Zero por ser "assustador", frio e calado, mas na verdade, é um rapaz que não quer e não consegue se envolver com outras pessoas, por ter presenciado a morte dos seus pais (que eram Caçadores de Vampiros e foram alvos de uma vingança) e por ter sido transformado em Vampiro. A única presença amiga que tolera é a da Yuuki, e mesmo assim sempre tenta afastá-la com medo de machuca-la. Mas uma noite, Zero não consegue mais conter os seus instintos e morde Yuuki. Atormentado pelo remorso, tenta abandonar o Colégio, mas é impedido por Yuuki que promete ajudá-lo. Como o seu corpo não consegue aceitar as pastilhas, Yuuki permite que ele se alimente dela, o que faz com que a amizade e a lealdade entre os dois aumente, mas ele sempre se menospreza por beber o sangue dela. Zero gosta de Yuuki, mais do que a uma irmã, mas devido a sua situação reprime esse sentimento. Ele odeia e sente muitos ciúmes de Kaname (entre os motivos o principal é a Yuuki). Zero sempre têm consigo a Bloody Rose (Rosa Sangrenta), uma arma antivampiros.